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核酸蛋白分離層析儀的純化方法

更新時間:2020-01-27點擊次數:1998
   核酸蛋白分離層析儀的純化方法
  沉淀法
  (1)鹽析沉淀法
  這是根據不同蛋白質在一定濃度的鹽溶液中溶解度降低程度不同,而達到彼此分離的方法,是蛋白質和酶提純工藝中較早采用,且至今仍廣泛應用的方法。
 
  蛋白質易溶于水,因為其分子的-COOH-NH2和-OH都是親水基團,這些基團與極性水分子相互作用形成水化層,包圍于蛋白質分子周圍形成1~100nm大小的親水膠體,從而削弱了蛋白質分子之間的作用力。
 
  當大量鹽加到蛋白質溶液中,高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO42-和NH4+)有很強的水化力,可奪取蛋白質分子的水化層,使之"失水",于是蛋白質膠粒凝結并沉淀析出。
 
  (2)等電點沉淀法
  是利用蛋白質在等電點時溶解度較低,而各種蛋白質具有不同的等電點來分離蛋白質的方法,稱為等電點沉淀法。
 
  由于等電點時蛋白質的凈電荷為零,失去了水化膜和分子間的相斥作用,疏水性氨基酸殘基暴露,蛋白質分子相互靠攏聚集,易形成沉淀析出。
 
  (3)有機溶劑沉淀法
  此法原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇等)能使某些蛋白質在水中的溶解度顯著降低。在室溫下,有機溶劑不僅能夠引起蛋白質的沉淀,而且伴隨變性。
 
  因此,通常要將有機溶劑冷卻,然后在不斷的攪拌下加入有機溶劑,以防止局部濃度過高,蛋白質變性問題就可以很大程度上得到解決。
 
  用此法析出的沉淀一般比鹽析法易過濾或離心沉降,分離后的蛋白質沉淀應立即用水或者緩沖液溶解,以達到降低有機溶劑的濃度的目的。此法在血液制品的制備過程中較多使用。

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