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體外重組蛋白表達(dá)的蛋白純化標(biāo)簽如何選擇

更新時(shí)間:2021-08-26點(diǎn)擊次數(shù):1967

 那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于體外重組蛋白表達(dá)的蛋白純化標(biāo)簽如何選擇。 

       體外重組蛋白表達(dá)技術(shù)已經(jīng)滲透到生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。目前,體外重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)主要有四類:原核表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)、酵母表達(dá)系統(tǒng)及昆蟲細(xì)胞表達(dá)。表達(dá)的一般實(shí)驗(yàn)包括載體構(gòu)建-表達(dá)鑒定-蛋白純化三大步驟。在構(gòu)建載體階段,除了一些必要的表達(dá)元件,還需要考慮的密碼子優(yōu)化和標(biāo)簽的選擇。選擇合適的標(biāo)簽不但有利于蛋白的純化,促進(jìn)蛋白的可溶性,同時(shí)也不能影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用。感謝使用上海金鵬蛋白純化系統(tǒng)Blupadstart進(jìn)行蛋白純化分離實(shí)驗(yàn)。

本文詳細(xì)介紹了幾種蛋白純化標(biāo)簽,幫助我們更好的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。
蛋白純化標(biāo)簽比較

融合標(biāo)簽大?。↘D)功能是否切除
HIS0.84有利純化,能純化可溶性/包涵體蛋白標(biāo)簽小,對(duì)蛋白無(wú)影響
GST26增強(qiáng)蛋白可溶性,僅能純化可溶性蛋白,屏蔽毒性蛋白標(biāo)簽較大,影響較大
MBP44.4增強(qiáng)蛋白可溶性,屏蔽毒性蛋白
NusA55增強(qiáng)蛋白可溶性,屏蔽毒性蛋白
SUMO11.2增強(qiáng)可溶性,屏蔽毒性蛋白

表1:各個(gè)標(biāo)簽性能對(duì)比表


HIS-Tag(組氨酸標(biāo)簽)

HIS-Tag蛋白純化的標(biāo)簽
HIS-Tag本身的特性對(duì)目的蛋白沒(méi)有影響,不會(huì)形成二聚體;

  1. 分子量較小,只有0.84KD,對(duì)蛋白的下游應(yīng)用不會(huì)產(chǎn)生影響;

  2. 原性低,可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行并制備抗體;

  3. HIS-Tag與的轉(zhuǎn)錄翻譯機(jī)制兼容,有利于蛋白表達(dá);

  4. 可與其他標(biāo)簽構(gòu)建雙標(biāo)簽表達(dá),可用于多種蛋白表達(dá)系統(tǒng),純化條件溫和對(duì)蛋白影響較小。

GST-Tag(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽)
GST-Tag相對(duì)分子質(zhì)量較大,約為26KD,插入在目的蛋白的C末端或N末端,大腸桿菌中常用在N端。GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 蛋白本身是一個(gè)在**過(guò)程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶。一般選擇GST標(biāo)簽的目的有兩個(gè),一是提高蛋白表達(dá)的可溶性,二是提高蛋白的表達(dá)量。蛋白表達(dá)純化結(jié)束后需根據(jù)不同的蛋白應(yīng)用而確定是否切除標(biāo)簽,標(biāo)簽較大,切除與否需根據(jù)下游應(yīng)用考慮。如果要去除GST融合部分,可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測(cè)方法可用GST抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測(cè)。

HIS-Tag由6-10個(gè)組氨酸殘基組成,分子量不到0.84KD,,通常插入在目的蛋白的C末端或N末端。HIS-Tag是目前原核表達(dá)常用的標(biāo)簽,蛋白純化完之后可以不需切除此標(biāo)簽,也不會(huì)對(duì)蛋白產(chǎn)生功能影響。同時(shí),蛋白純化步驟簡(jiǎn)便,純化條件溫和,對(duì)蛋白也不會(huì)產(chǎn)生太大影響。


 

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于體外重組蛋白表達(dá)的蛋白純化標(biāo)簽如何選擇。

 

我們上海金鵬分析儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超微量核酸蛋白測(cè)定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀、核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外檢測(cè)儀、蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等十幾個(gè)系列產(chǎn)品的廠家,歡迎大家前來(lái)訂購(gòu)


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